Кювети з аналізом ПЛР на туберкульоз
Зміст статті
- Що важливо знати
- Показання до проведення
- Що вдає із себе ПЛР
- Методика виконання
- ПЛР аналіз сечі на туберкульоз
Що важливо знати
Фото палички Коха (Mycobacterium tuberculosis) під мікроскопом
Туберкульоз — інфекційне захворювання, яке викликається мікобактерією — паличка Коха. Найчастіше вражаються легені, але осередки можуть бути і в інших тканинах. Передається респіраторно, а також зі слиною, кров’ю, при спільному використанні побутових приладів і тісному контакті в побуті.
Захворювання протікає в двох формах:
- Приватна стадія . Хворий при контакті не є небезпечним для оточуючих. В мокроті аналізи не виявляються ознаки збудників, помилкової буде і ПЛР діагностика на туберкульоз. При відсутності лікування патогенез посилюється.
- Відкрита стадія. Паличка Коха присутній в біологічних рідинах людини, легко діагностується лабораторними методиками. В такому стані людина є небезпечним для оточуючих.
Зверніть увагу. Оскільки початок туберкульозу легенів протікає латентно, то проводиться скринінг. Дорослі люди повинні раз на рік або два (залежить від регіону проживання) проходити флюорографію, яка показує наявність інфільтрату в тканинах. Це дешевий і швидкий спосіб діагностики.
На даний момент для виявлення небезпечних мікобактерій проводять ряд аналізів:
- методи рентгенографії.
- КТ або МРТ.
- туберкулінові проби (реакція Манту).
Однак саме аналіз крові на ПЛР на туберкульоз дає найбільш достовірний результат, причому визначає наявність інфекції поза залежно від локації вогнища.
Показання до проведення
Чи не проходить кашель один із симптомів, при якому показано обстеження на туберкульоз
Лікар фтизіатр, пульмонолог або терапевт може направити хворого на проходження діагностики при наявності підозр.
Крім цього, тест ПЛР на туберкульоз потрібно, якщо:
- можливі позалегеневі вогнища .
- наявність ознак бактеріємії на тлі туберкульозної інфекції (субфебрилітет, пітливість і інші).
- при регулярному контакті з інфікованою людиною.
- при ВІЛ-інфекції.
- ПЛР діагностика тубер кулеза у дітей показана при ненормальною реакції на пробу Манту.
- сильні збільшення лімфовузлів при захворюванні нижніх дихальних шляхів (прикореневі запалення легенів, бронхіти).
- кровохаркання при цьому людина слабка і швидко втомлюється.
- тривалий кашель після гострих бронхітів і пневмоній.
Що вдає із себе ПЛР
Принцип ПЛР аналізу
Полімеразна ланцюгова реакція заснована на розпізнаванні цілих ланцюжків бактеріальної ДНК і РНК або їх фрагментів, які перебувають в крові пацієнта або інших біологічних рідинах:
- мокрота.
- легеневі і бронхіальні змиви.
- сеча.
Зверніть увагу. Висока результативність даної методики заснована на принципі роботи ферменту полімерази (основна функція збірка нуклеїнових молекул). Вона може дізнаватися навіть найдрібніші фрагменти генного матеріалу збудника. Тому результат буде позитивний або негативний.
Переваги аналізу ПЛР на мікобактерії туберкульозу:
- виявлення специфічних послідовностей ДНК мікобактерій.
- точність — 98%.
- чутливість аналізу не менше 100 ДНК-копій в 5 мкл пробі, що пройшла особливу обробку.
- терміновий аналіз дає можливість отримати результат протягом 4 ч., після забору крові.
Використання полімеразної ланцюгової реакції істотно полегшило визначення багатьох захворювань (не тільки туберкульозу). Причому метод дозволяє реєструвати наявність патогена на самих початкових стадіях патогенезу, коли немає ще ніяких ознак. Гарантованість результату забезпечується завдяки тому, що полімераза серед тисяч клітин може знаходити за певним маркера комплементарні (відповідні) тільки їй послідовності бактеріальних генів або навіть їх фрагменти.
Крім цього, ПЛР при туберкульозі допомагає з’ясувати рівень резистентності до призначеної терапії і скорегувати лікування, що в рази підвищує його ефективність. Тривалість такого аналізу три, максимум чотири дні, але при цьому лікар отримує дані, що змінюють якість протитуберкульозної терапії. Більш докладно про всі нюанси полімеразної ланцюгової реакції викладено на відео в цій статті.
Методика виконання
Інструкція проведення аналізу на даний момент не представляє особливої складності: спочатку проводиться відбір досліджуваного матеріалу, після чого виділяється ДНК і проводиться його класифікація за типом патогенної бактерії. Основні моменти вказані в таблиці.
Таблиця. Як проводиться аналіз ПЦР на туберкульоз:
Дія Коментар
Отримання зразка
У пацієнта беруть певний кількість крові, мокротиння, сечі або змиви з бронхів.
Денатурація ДНК
Отриманий матеріал має бути на кілька хвилин нагрітий до високих температур (97º С). Такий захід потрібна для розщеплення парних молекул нуклеїнових кислот на окремі ланцюги (розрив спіралі). Це потрібно для того, щоб полімераза розпочала роботу.
Відпал
При зниженні температури особлива молекулярна структура праймер, асоціюється з однією з вільних ланцюгів ДНК, що дозволить в подальшому ініціювати складання нової спіралі.
Елонгація
Полімераза починає збірку нових ланцюгів генома.
Аналіз результату
Якщо полімераза знайшла потрібні бактеріальні послідовності і почала збірку, то результат позитивний, в іншому випадку негативний.
Для отримання достовірного результату, що дає максимальну точність, знадобиться проведення близько 25-30 циклів, що дасть можливість отримати необхідну кількість копій бактеріальних ДНК. При цьому вони підлягають класифікації. Це вимагає наявності спеціально обладнаній лабораторії, тому не у всіх регіонах є можливість проведення ПЛР. Відповідно і ціна дослідження не є низькою.
В особливих випадках даний метод є єдино можливим або вкрай необхідним, наприклад:
- при наявності протипоказань до іншим діагностики.
- в спірних ситуаціях.
- при рецидив туберкульозу.
- визначення стадійності патогенезу.
Замітка. Якщо аналіз ПЦР проводиться для людини після протитуберкульозної терапії, то результат може бути хибнопозитивним. Це пов’язано з наявністю в крові дуже малої кількості мертвих бактерій або вони ще знаходяться на стадії лізису (клітинної смерті).
ПЛР аналіз сечі на туберкульоз
Сеча, зібрана в контейнер для аналізу
Суть методу та ж, що і при дослідженні крові. Однак в даному випадку потрібен певний алгоритм здачі і підготовки. ПЛР сечі допоможе виявити мікобактерії при наявності вогнищ в органах видільної системи і підібрати відповідну терапію.
Перед забором урини важливо добре вимити геніталії. Ранкову сечу (середню порцію) збирають в контейнер і відправляють в лабораторію. Інших підготовчих заходів не потрібно, харчування напередодні аналізу залишається без змін.